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血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。胎牛血清是血清中的一种,是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清。胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。6 F' j+ j3 [2 a* h5 z7 A, E8 F2 D. ]
! j$ F/ a3 r2 Q& g) R胎牛血清的主要作用
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3 B9 |. `& f B1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
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& J: H% [9 ]8 Z- Y/ j$ K# T. w3 R2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。. R$ g3 x6 i2 n7 g/ H
: C8 _. r6 w0 r. l3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。$ ?* Y0 x; z$ r9 c+ p9 @
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4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
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' A4 ` j$ d, ^( \: Z( z# I5.起酸碱度缓冲液作用。
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+ o1 r, W- j$ _# B8 p S6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
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胎牛血清的选择
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Z$ g- Y$ G% e- K5 Y* W7 U. L! C根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高度对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程中严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。& y) Y$ `. W" O
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进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。+ o) H: x2 D' A$ P$ z- e( y
- k* {- _; f& H9 X总的来说,国产的血清总呈现出蜡黄,进口的血清质量最好的呈现出淡黄、微红色。当然热灭活血清或保存不当的血清,由于红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。" E5 B! \8 P& X7 B+ ~
- a% _8 S6 K W2 T7 C# O6 t1 S# }# _2.沉淀
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很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。
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- P$ y4 g1 }: `7 u0 |1 R血清中的沉淀是由纤维蛋白凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。2 R, u, M# q# e) r1 P* Q
7 l6 i2 l h9 T2 ~6 ~6 `6 `国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产经过多次冻融,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。+ ~. \- w* G8 ]4 g) U, T
& l- C% }* D) H/ w: I: _4 z& M进口的胎牛血清过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中大量纤维蛋白会析出形成沉淀,当然,进口的新生牛血清,一般牛年龄在2周左右,血清中的各种大量纤维蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。
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$ q; D: O; t: G8 u$ i5 {当然,购买回来的血清都是冷冻状态,使用时需要融化,融化过程最好在温度较低的状态下慢慢融化,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。# V( C, v% M; c* N) o# F
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3.澄清度& o c3 U* T) T$ O. m) H
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进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,标签为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,对于初步接触血清的人很难判断,但把两者进行对比,可容易分辨。. Y# m u9 n0 K
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